Ako urobiť tkanivovú kultúru?
Ak chcete urobiť tkanivovú kultúru, najskôr si prečítajte protokol výrobcu, aby ste sa presvedčili, že správne prenášate vzorku tkaniva do kultivačného prostredia. Keď tkanivo prenesiete, budete ho musieť udržiavať na konštantnej teplote a pH, aby nedošlo k jeho odumretiu. Budete tiež musieť dodržiavať pokyny výrobcu o kŕmení vzorky každé 2 až 3 dni, aby ste sa uistili, že pokračuje v raste. Okrem toho, ak sú bunky príliš husté, môžu prestať rásť, preto skúste niektoré bunky preniesť do novej misky, ak bude príliš preplnená. Ak chcete získať ďalšie rady o tom, ako pripraviť prostredie kultúry, prečítajte si viac od nášho spoluautora sestry!
Ak chcete urobiť tkanivovú kultúru, najskôr si prečítajte protokol výrobcu, aby ste sa presvedčili, že vzorku tkaniva správne prenášate do kultivačného prostredia.
Tkanivová kultúra je spôsob, ako získať viac buniek z tkaniva tým, že ich vypestujete z organizmu. Na to je potrebné vytvoriť umelé prostredie, v ktorom bunky budú rásť. Potom, čo boli bunky kultivované, môžu byť použité v mnohých rôznych typov štúdií, vrátane štúdií o biochémii tkanív a vývoja z liekov.
Časť 1 z 2: Príprava na kultúru
- 1Stanovte si, čo budete kultivovať. Je možné kultivovať rastlinné aj živočíšne bunky. Ľudia niekedy chcú kultivovať tkanivo, ktoré bolo získané priamo z rastliny alebo zvieraťa. Inokedy sa bunky kultivujú z bunkovej línie, ktorá sa predtým kultivovala a skladovala.
- Odberom tkaniva z organizmu je možné vytvoriť nové kultúry. Tieto bunky sa nazývajú primárna kultúra. Budú sa deliť len tak dlho, kým prejdú starnutím.
- Kontinuálne bunková línia bola zmenená s použitím chemikálií alebo vírusov tak, že bunky budú pokračovať do nekonečna deliť.
- 2Pripravte prostredie kultúry. Podmienky budú pre rôzne typy buniek odlišné, ale vo všeobecnosti kultúra bude vyžadovať:
- Riadená teplota. Najlepšia teplota sa bude líšiť podľa typu buniek, ktoré pestujete, ale pravdepodobne sa bude pohybovať medzi 20-45°C.
- Riadené pH. Najlepšie pH bude pravdepodobne niekde medzi 6,0 a 7,5.
- Riadené osmotický tlak
- Dostatočná výmena kyslíka a oxidu uhličitého
- Hormóny
- Rastové faktory
- Substrát, ktorý bunkám dodá potrebné živiny. Patria sem aminokyseliny, sacharidy, vitamíny a minerály.
- Svetlo. Svetlo je rozhodujúce, ak pestujete rastlinné bunky, ktoré musia fotosyntetizovať.
- 3Rozhodnite sa, aký typ substrátu poskytnete. Mnoho typov buniek rastie najlepšie, keď sú pripevnené k substrátu. Medzi možné typy substrátov patria:
- Pevný substrát, tiež nazývaný adherentný. Tkanivá získané z orgánov, ako sú obličky, zvyčajne priľnú, pretože sú fixované v spojivovom tkanive.
- Polotuhý alebo jednovrstvový substrát. Tieto typy kultúr spravidla tvoria vrstvu, v ktorej je jedna bunka umiestnená hlboko na dne.
- Suspenzná kultúra. Bunky tohto typu nemusia byť ukotvené k substrátu a budú namiesto toho rásť pri plávaní. Bunky z krvi sa často kultivujú v suspenzii.
Tkanivová kultúra je spôsob, ako získať viac buniek z tkaniva tým, že ich vypestujete z organizmu.
Časť 2 z 2: Vykonávanie kultúry
- 1Na spustenie kultivácie postupujte podľa protokolov výrobcu. Existuje niekoľko spoločností, ktoré dodávajú laboratóriám materiál a vybavenie na vedenie kultúr. Pri nákupe materiálov k nim dostanete aj protokoly o zahájení kultúry. Tieto protokoly presne popíšu, ako by ste mali preniesť vzorku, ktorú chcete kultivovať, do prostredia kultúry. Medzi niekoľko známych spoločností patrí:
- Qiagen
- Fisher Scientific
- Thermo Scientific
- 2Bunky nakŕmte, ak pracujete s bunkami cicavcov. Kultivačné médium je spravidla potrebné dopĺňať každé 2 - 3 dni. Pri napájaní buniek dodržiavajte protokoly výrobcu.
- Tento proces by mal trvať 20 minút alebo menej.
- Ak neposkytnete dostatok živín, bunky, ktoré máte, odumrú.
- 3Rozdelené kultúry, ktoré sa začínajú preplňovať. Aby kultúra rástla, možno budete musieť niektoré bunky premiestniť do novej misky s nižšou hustotou. To umožní pôvodnej kultúre aj novej kultúre pokračovať v raste.
- Môžete tiež zmraziť niektoré kultúry pre budúcu prácu alebo pre opakovanie experimentov, ak máte v budúcnosti problémy s kontamináciou. Na stanovenie teploty pre kryokonzerváciu alebo zmrazenie kultúr postupujte podľa uvedených protokolov.
Prečítajte si tiež: Ako zabrániť zdravotným chybám?
Otázky a odpovede
- Aké sú kroky tkanivovej kultúry?Príprava na kultúru, nastavenie environmentálnych faktorov pre kultúru, povaha substrátu, kŕmenie kultivačných buniek, ak je to potrebné, premiestnenie nových kultivačných buniek do inej misky, keď je preplnená.
- Mala by byť kultúra umiestnená na slnko, ak používam tkanivo z rastliny?Môže byť umiestnená na slnko alebo svetlo, inak rastlina nemôže podstúpiť fotosyntézu a dýchanie.
- Prečo potrebujem tkanivovú kultúru?Záleží. Som záhradník, takže sa pokúšam klonovať vzácne a tropické rastliny.
Komentáre (1)
- Vďaka obrázkom je ľahké pochopiť metódy zahrnuté v technikách a požiadavkách na tkanivovú kultúru rastlín.
Prečítajte si tiež:
Vylúčenie lekárskej zodpovednosti Obsah tohto článku nemá slúžiť ako náhrada odbornej lekárskej pomoci, vyšetrenia, diagnostiky alebo liečby. Pred začatím, zmenou alebo ukončením akejkoľvek zdravotnej starostlivosti by ste mali vždy kontaktovať svojho lekára alebo iného kvalifikovaného zdravotníckeho pracovníka.
